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常用培養基及基本特性

時間: 2019-06-27 09:17 來源: 未知 作者: admin 點擊:
培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之,使用MEM做粘附細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養是一個好的開始。
 
        1、Minimum Essential Medium(MEM):也稱必需培養基,它僅含有 12 種必需氨基酸、谷氨酰胺和 8 種維生素。成分簡單,可廣泛適應各種已建成細胞系和不同地方的哺乳動物細胞類型的培養。MEM-Alpha 一般用于培養一些難培養細胞類型,而其它沒有特殊之處的細胞株則幾乎均可采用 MEM 來培養。
 
        2、BEM(DMEM)培養基:是為小鼠成纖維細胞設計的,現在常用于貼壁細胞的培養。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍,維生素濃度是MEM的4倍,采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。*初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L,后來為了某些細胞的生長需要,將葡萄糖含量又調整為4500 mg/L,這就是大家常說的低糖和高糖了。
 
        DMEM-高糖(標準型)是一種應用十分廣泛的培養基,可用于許多哺乳動物細胞培養, 更適合高密度懸浮細胞培養。適用于附著性較差,但又不希望它脫離原來生長點的克隆培養,也可用于雜交瘤中骨髓瘤細胞和 DNA 轉染的轉化細胞的培養。
 
        DMEM-低糖(標準型)是一種應用十分廣泛的培養基,可用于許多哺乳動物細胞培養。低糖適于依賴性貼壁細胞培養,特別適用于生長速度快、附著性較差的腫瘤細胞培養。
 
        3、aMEM培養基:含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸,它可廣泛應用于各種細胞類型,包括對營養成分要求苛刻的細胞。
 
        4、Ham’s F12培養基:是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設計的,現在也廣泛應用于克隆形成率的分析及原代培養。F12還可以與DMEM等體積混合使用,得到一種高濃度與成分多樣化相結合的產物,這種培養基已應用于許多原代培養及更難養的細胞系的培養。
 
        5、DMEM/F12:DMEM/F12 培養基適于克隆密度的培養。F12 培養基成分復雜,含有多種微量元素,和 DMEM 以 1:1 結合,稱為 DMEM/F12 培養基。(DMEM/F12medium),作為開發無血清配方的基礎,以利用 F12 含有較豐富的成分和 DMEM 含有較高濃度的營養成分為優點。該培養基適用于血清含量較低條件下哺乳動物細胞培養。為了增強該培養基的緩沖能力,改良是在 DMEM/F12(1:1)中加入 15 mMHEPES 緩沖液。
 
        6、RPMI-1640 Medium:RPMI-1640 廣泛應用于哺乳動物、特殊造血細胞、正常或惡性增生的白細胞,雜交瘤細胞的培養,是目前應用十分廣泛的培養基。主要用于懸浮細胞培養。其它像 K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9 等成淋巴細胞、T 細胞淋巴瘤細胞以及 HCT-15 上皮細胞等均可參考使用。
 
        7、M-199 Medium:1950 年,Morgan 成功研制出具有確定化學成分的細胞培養液,即 M-199,主要用于雞胚成纖維細胞培養。此培養液必須輔以血清才能支持長期培養。M-199 可用于培養多種種屬來源的細胞,并能培養轉染的細胞。
 
        以前大部分實驗室都是用干粉培養基,但配制過程就較為繁瑣,要溶解、調pH值,過濾,過程中可能會產生一些濃度誤差,而且有些實驗室的水質并不理想,所以培養的效果會有差異。如果使用液體培養基,這種人為的誤差會減少,因為畢竟是大批量工業化生產的,批間差會很小。大家是不是感覺液體培養基會貴很多,以前是這樣,但現在非也。
 
        二、培養基在使用過程中應注意的問題?
 
        1、 培養基在使用前需電熱恒溫培養箱內37 ℃預熱或在室溫平衡后再使用。
 
        2、 細胞培養過程中,吸取過培養液的吸管不能再用火焰燒灼,防止殘留在吸管內的培養基焦化,將有害物質帶入培養液中。
 
        3、 盡量縮短各種液體、細胞的暴露時間。
 
        4、 避免液體間、細胞間的交叉污染。
 
        5、配制完全培養基時,配制的量建議在2周內用完為好。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
 
        6、當在無血清培養基中添加抗生素時,降低至少在有血清培養基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結合和滅活一些抗生素。在無血清培養條件下,抗生素不被滅活,可能對于細胞達到毒性水平。
 
        7、如果細胞培養基偶然被凍,您應該熔化培養基并觀察是否有沉淀產生。如果沒有沉淀產生,培養基可以正常使用,如果出現沉淀,只能丟棄這些培養基。

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