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細胞培養常見污染的識別

時間: 2019-06-27 09:18 來源: 未知 作者: admin 點擊:
⒈細菌
 
        識別:細菌在顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,有球形,鏈形,桿形等。大家不必深究。只要發現培養液渾濁變黃,培養瓶頂部有一層細沙一樣的東西。就知道大事不好啦。
 
        處理:可在培養液中加相應的抗生素處理。可以用四環素,慶大霉素,或者鏈霉素,前兩者的工作濃度是50 μg/mL;鏈霉素的工作濃度是100 μg/mL。其實一旦發生污染,就已經大勢已去了。如果細胞不是特別特別珍貴的話,還是趁早扔了,重起爐灶吧。
 
        所以,重要的還是防范于未然。做好培養間,CO2培養箱,器皿和培養液的消毒滅菌工作。在操作的時候,嚴格執行無菌操作規范。
 
 
 
⒉霉菌
 
        識別:因為培養液是清亮的,所以霉菌污染非常難以早期發現,等發現時往往已經為時過晚了。培養液中慢慢地出現絮狀雜質,鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,如同風中柳絮。細胞仍可生長,但時間一長,細胞的狀態就變差。
 
        處理:細胞一旦被霉菌污染,很難挽救,兩性霉素B或制霉菌素都于事無補,建議果斷舍棄該污染細胞,將環境消毒。
 
        采用酒精底地擦洗一遍CO2培養箱。然后再用新潔爾滅擦洗一遍。把水盤里加上飽和量的硫酸銅。
 
 
 
⒊支原體
 
        識別:多為多邊形,培養液一般會變渾濁。支原體感染細胞以后,細胞病變不很明顯,只是和你一起慢慢變老。支原體污染后,可影響的細胞生長參數。故進行實驗前,確認細胞為mycoplasma-free,實驗結果之數據方有意義。
 
        處理:沒有什么好處理的。直接扔了吧。
 
 
 
⒋黑蛟蟲
 
        識別:誰都不知道所謂的“黑膠蟲”是什么東西。據說是納米級的細菌。低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去。培養液也是不渾的,一般不會太影響。但是如果太多了,也會影響細胞生長和實驗結果。
 
        處理:因為根本不知道這是什么物種,所以也談不上什么處理方式。建議如果細胞有可能是此種污染的話,可以增加細胞的種板密度,以提高細胞的生存率。
 
 
 
⒌真菌
 
        識別:真菌污染和霉菌污染差不多。一般培養液清亮,所以很難早期發現。鏡下有時候象絲狀,有時候象珊瑚狀。慢慢地會長出很細的黑色絲狀物。這個時候,已經晚了,細胞很難救活了。
 
        處理:同霉菌污染一樣,沒有什么好處理的,直接扔了吧。然后消毒滅菌培養間,CO2培養箱,器皿和培養液。
 
        綜上所述,兩個原則:預防為主,果斷扔掉。如果細胞實在特別特別特別珍貴。那就只好死馬當活馬醫了。用廣譜抗生素5倍推薦濃度沖擊一下。當然細胞狀態差的話不熬得住。同時增加傳代時的細胞的密度,培養基中的血清濃度,勤換液。也可以不加抗生素進行單克隆有限稀釋至96孔板,再克隆化。

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